Arcibald
Avatar di Jacopo Robusti
Buonasera, visto che sta per cominciare lo studio di fase I/II sul CD44v6 nella leucemia mieloide acuta e nel mieloma multiplo, farà piacere leggere un abstract presentato ad ASH che conferma i progressi nel contrasto della tossicità anche per i tumori solidi dopo la notizia uscita a fine Maggio.
Sotto, la notizia uscita a Maggio e l'abstract. A seguire l'abstract tradotto:
CAR-T contro i tumori: individuato al San Raffaele il meccanismo alla base degli effetti collaterali | Ospedale San Raffaele
Paper: Combining De-Glycosylating Agents with CAR-T Cells for Targeting Solid Tumors and Reducing Toxicity
4544 Combinazione di agenti di glicosilatazione con cellule CAR-T per il targeting dei tumori solidi e la riduzione della tossicità
Programma:
Sessione di abbozzi di poster e orali : 703. Immunoterapia adottiva:
patologia ematologica poster III Argomenti e percorsi:
biologia, terapie, CAR-Ts, processi biologici, meccanismo immunitario
Lunedì 3 dicembre 2018, dalle 18:00 alle 20:00
Hall GH (San Diego Convention Center)
Beatrice Greco, PhD 1 * , Katia Paolella 2 * , Barbara Camisa 3 * , Valeria Malacarne, PhD 4 * , Laura Falcone 3 * , Andrea Graziani, PhD 4 * , Chiara Bonini, MD 5 , Attilio Bondanza, MD 6 e Monica Casucci , Dottorato 2 *
1 Unità di Immunoterapia Innovativa, Divisione di Immunologia, Trapianti e Malattie Infettive, Università Vita-Salute San Raffaele, Milano, Italia
2 Unità di Immunoterapia Innovativa, Divisione di Immunologia, Trapianti e Malattie Infettive, IRCCS Istituto Scientifico San Raffaele, Milano, ITA
3 Unità di Immunoterapia Innovativa, Divisione di Immunologia, Trapianti e Malattie Infettive, Istituto Scientifico San Raffaele IRCCS, Milano, Italia
4 Unità di Segnalazione Lipidica in Tumori e Metabolismo, Divisione di Oncologia Sperimentale, Istituto Scientifico San Raffaele IRCCS, Milano, Italia
5Istituto Scientifico San Raffaele, Unità di Ematologia Sperimentale, Divisione di Immunologia, Trapianto e Malattie infettive, Milano, Italia
6 Istituti Novartis per la Ricerca Bioedrica (NIBR), Basilea, Svizzera
Background: il trasferimento adottivo di cellule CAR-T ha mostrato risultati impressionanti contro le neoplasie delle cellule B, ma ha ancora un'efficacia limitata contro i tumori solidi. La scoperta dei fattori chiave che regolano l'attività delle cellule CAR-T è necessaria per migliorare la loro potenza antitumorale e modulare le tossicità. Poiché i tumori solidi mostrano un'ampia gamma di alterazioni della glicosilazione, inclusa una maggiore ramificazione di N-glicani, abbiamo ipotizzato che gli epitopi peptidici possano essere mascherati dai glicani provenienti dal targeting per cellule CAR-T, specialmente nelle proteine riccamente glicosilate.
risultati: Per studiare se le catene zuccherine possano essere stericamente pesanti per il targeting di cellule CAR-T, abbiamo generato linee di cellule tumorali pancreatiche difettose per la N-glicosilazione. Questo obiettivo è stato raggiunto eliminando l'espressione della glicosiltransferasi Mgat5, un enzima chiave coinvolto nel processo di ramificazione del N-glicano, utilizzando la tecnologia CRISPR-Cas9. Come antigeni modello per il targeting CAR, ci siamo concentrati su CD44v6 e CEACAM-5 (CEA) poiché sono entrambe proteine fortemente glicosilate sovra-espresse su un'ampia varietà di tumori solidi, tra cui l'adenocarcinoma pancreatico. Sorprendentemente, la compromissione della N-glicosilazione ha comportato un drastico aumento del targeting del tumore da parte di CD44v6 (4 volte, p <0,001) e cellule CAR-T CEA (10 volte, p <0,001). Questo effetto è associato ad una migliore attivazione delle cellule CAR-T, suggerendo un coinvolgimento più efficace degli antigeni. Per sfruttare questo meccanismo al fine di aumentare l'efficacia delle cellule CAR-T contro i tumori solidi, abbiamo cercato di bloccare la N-glicosilazione del tumore con l'analogo glucosio / mannosio analogico 2-Deoxy-D-glucosio (2DG). Analogamente al blocco della glicosilazione geneticamente indotto, il trattamento con 2DG ha anche sensibilizzato le cellule tumorali al riconoscimento delle cellule CAR-T, aumentando significativamente la loro eliminazione (CD44v6: 3 volte, p <0,01; CEA: 13 volte, p <0,001). In particolare, solo 2DG si è rivelato inefficace come mono-terapia, suggerendo un effetto sinergico con le cellule CAR-T. Per ottenere maggiori informazioni su questo meccanismo, abbiamo approfittato di studi precedenti che riportano che l'interferenza 2DG con N-glicosilazione può essere ripristinata mediante l'aggiunta di mannosio esogeno. Di nota, mannose ha ripristinato la sinergia tra le celle 2DG e CAR-T (p <0,05), implicando che il blocco della N-glicosilazione piuttosto che della glicolisi è il meccanismo cruciale coinvolto. Questi risultati sono stati ulteriormente confermati usando l'inibitore della N-glicosilazione tunicamicina (CD44v6: 2,5 volte, CEA: 5 volte, p <0,01) e con Western blot, osservando la presenza di proteine de-glicosilate sul tumore superficie cellulare dopo il trattamento 2DG. Successivamente, abbiamo sfidato l'approccio combinato in un modello di topo xenograft adenocarcinoma del pancreas. Di conseguenza con abbiamo sfidato l'approccio combinato in un modello di topo xenograft adenocarcinoma del pancreas. Di conseguenza con abbiamo sfidato l'approccio combinato in un modello di topo xenograft adenocarcinoma del pancreas. Di conseguenza condati in vitro , i topi che hanno ricevuto cellule CAR-T hanno tratto beneficio dalla somministrazione di 2DG (5 volte meno tumore a 7 d, p <0,05), che al contrario non era in grado di mediare alcun effetto antitumorale da solo. È interessante notare che l'attività antitumorale migliorata è stata accompagnata da una diminuzione della frequenza delle cellule CAR-T che esprimono uno o più marker di esaurimento e senescenza, come TIM-3, LAG-3, PD-1 e CD57 (analisi del software SPICE, p = 0 , 0105). Infine, grazie alla deregolamentazione metabolica (effetto Warburg), si prevede che il 2DG si accumuli selettivamente nelle cellule tumorali rispetto ai tessuti sani, supportando la sicurezza dell'approccio combinato. Di conseguenza, abbiamo osservato che le stesse dosi di 2DG in grado di migliorare il riconoscimento delle cellule tumorali da parte delle cellule CAR-T non hanno aumentato l'eliminazione di cellule sane, come i cheratinociti.
Conclusioni: I nostri risultati indicano che i) lo stato di glicosilazione delle cellule tumorali regola l'efficacia delle cellule CAR-T, specialmente quando si prendono di mira antigeni altamente glicosilati, e ii) combinando cellule CAR-T con l'agente di glicosilazione 2DG, che si accumula preferenzialmente in masse tumorali, possono aprire la strada per un'immunoterapia di successo contro i tumori solidi.
Disclosures: Bonini: Intellia Therapeutics: finanziamento della ricerca. Bondanza: Novartis: occupazione.
Sotto, la notizia uscita a Maggio e l'abstract. A seguire l'abstract tradotto:
CAR-T contro i tumori: individuato al San Raffaele il meccanismo alla base degli effetti collaterali | Ospedale San Raffaele
Paper: Combining De-Glycosylating Agents with CAR-T Cells for Targeting Solid Tumors and Reducing Toxicity
4544 Combinazione di agenti di glicosilatazione con cellule CAR-T per il targeting dei tumori solidi e la riduzione della tossicità
Programma:
Sessione di abbozzi di poster e orali : 703. Immunoterapia adottiva:
patologia ematologica poster III Argomenti e percorsi:
biologia, terapie, CAR-Ts, processi biologici, meccanismo immunitario
Lunedì 3 dicembre 2018, dalle 18:00 alle 20:00
Hall GH (San Diego Convention Center)
Beatrice Greco, PhD 1 * , Katia Paolella 2 * , Barbara Camisa 3 * , Valeria Malacarne, PhD 4 * , Laura Falcone 3 * , Andrea Graziani, PhD 4 * , Chiara Bonini, MD 5 , Attilio Bondanza, MD 6 e Monica Casucci , Dottorato 2 *
1 Unità di Immunoterapia Innovativa, Divisione di Immunologia, Trapianti e Malattie Infettive, Università Vita-Salute San Raffaele, Milano, Italia
2 Unità di Immunoterapia Innovativa, Divisione di Immunologia, Trapianti e Malattie Infettive, IRCCS Istituto Scientifico San Raffaele, Milano, ITA
3 Unità di Immunoterapia Innovativa, Divisione di Immunologia, Trapianti e Malattie Infettive, Istituto Scientifico San Raffaele IRCCS, Milano, Italia
4 Unità di Segnalazione Lipidica in Tumori e Metabolismo, Divisione di Oncologia Sperimentale, Istituto Scientifico San Raffaele IRCCS, Milano, Italia
5Istituto Scientifico San Raffaele, Unità di Ematologia Sperimentale, Divisione di Immunologia, Trapianto e Malattie infettive, Milano, Italia
6 Istituti Novartis per la Ricerca Bioedrica (NIBR), Basilea, Svizzera
Background: il trasferimento adottivo di cellule CAR-T ha mostrato risultati impressionanti contro le neoplasie delle cellule B, ma ha ancora un'efficacia limitata contro i tumori solidi. La scoperta dei fattori chiave che regolano l'attività delle cellule CAR-T è necessaria per migliorare la loro potenza antitumorale e modulare le tossicità. Poiché i tumori solidi mostrano un'ampia gamma di alterazioni della glicosilazione, inclusa una maggiore ramificazione di N-glicani, abbiamo ipotizzato che gli epitopi peptidici possano essere mascherati dai glicani provenienti dal targeting per cellule CAR-T, specialmente nelle proteine riccamente glicosilate.
risultati: Per studiare se le catene zuccherine possano essere stericamente pesanti per il targeting di cellule CAR-T, abbiamo generato linee di cellule tumorali pancreatiche difettose per la N-glicosilazione. Questo obiettivo è stato raggiunto eliminando l'espressione della glicosiltransferasi Mgat5, un enzima chiave coinvolto nel processo di ramificazione del N-glicano, utilizzando la tecnologia CRISPR-Cas9. Come antigeni modello per il targeting CAR, ci siamo concentrati su CD44v6 e CEACAM-5 (CEA) poiché sono entrambe proteine fortemente glicosilate sovra-espresse su un'ampia varietà di tumori solidi, tra cui l'adenocarcinoma pancreatico. Sorprendentemente, la compromissione della N-glicosilazione ha comportato un drastico aumento del targeting del tumore da parte di CD44v6 (4 volte, p <0,001) e cellule CAR-T CEA (10 volte, p <0,001). Questo effetto è associato ad una migliore attivazione delle cellule CAR-T, suggerendo un coinvolgimento più efficace degli antigeni. Per sfruttare questo meccanismo al fine di aumentare l'efficacia delle cellule CAR-T contro i tumori solidi, abbiamo cercato di bloccare la N-glicosilazione del tumore con l'analogo glucosio / mannosio analogico 2-Deoxy-D-glucosio (2DG). Analogamente al blocco della glicosilazione geneticamente indotto, il trattamento con 2DG ha anche sensibilizzato le cellule tumorali al riconoscimento delle cellule CAR-T, aumentando significativamente la loro eliminazione (CD44v6: 3 volte, p <0,01; CEA: 13 volte, p <0,001). In particolare, solo 2DG si è rivelato inefficace come mono-terapia, suggerendo un effetto sinergico con le cellule CAR-T. Per ottenere maggiori informazioni su questo meccanismo, abbiamo approfittato di studi precedenti che riportano che l'interferenza 2DG con N-glicosilazione può essere ripristinata mediante l'aggiunta di mannosio esogeno. Di nota, mannose ha ripristinato la sinergia tra le celle 2DG e CAR-T (p <0,05), implicando che il blocco della N-glicosilazione piuttosto che della glicolisi è il meccanismo cruciale coinvolto. Questi risultati sono stati ulteriormente confermati usando l'inibitore della N-glicosilazione tunicamicina (CD44v6: 2,5 volte, CEA: 5 volte, p <0,01) e con Western blot, osservando la presenza di proteine de-glicosilate sul tumore superficie cellulare dopo il trattamento 2DG. Successivamente, abbiamo sfidato l'approccio combinato in un modello di topo xenograft adenocarcinoma del pancreas. Di conseguenza con abbiamo sfidato l'approccio combinato in un modello di topo xenograft adenocarcinoma del pancreas. Di conseguenza con abbiamo sfidato l'approccio combinato in un modello di topo xenograft adenocarcinoma del pancreas. Di conseguenza condati in vitro , i topi che hanno ricevuto cellule CAR-T hanno tratto beneficio dalla somministrazione di 2DG (5 volte meno tumore a 7 d, p <0,05), che al contrario non era in grado di mediare alcun effetto antitumorale da solo. È interessante notare che l'attività antitumorale migliorata è stata accompagnata da una diminuzione della frequenza delle cellule CAR-T che esprimono uno o più marker di esaurimento e senescenza, come TIM-3, LAG-3, PD-1 e CD57 (analisi del software SPICE, p = 0 , 0105). Infine, grazie alla deregolamentazione metabolica (effetto Warburg), si prevede che il 2DG si accumuli selettivamente nelle cellule tumorali rispetto ai tessuti sani, supportando la sicurezza dell'approccio combinato. Di conseguenza, abbiamo osservato che le stesse dosi di 2DG in grado di migliorare il riconoscimento delle cellule tumorali da parte delle cellule CAR-T non hanno aumentato l'eliminazione di cellule sane, come i cheratinociti.
Conclusioni: I nostri risultati indicano che i) lo stato di glicosilazione delle cellule tumorali regola l'efficacia delle cellule CAR-T, specialmente quando si prendono di mira antigeni altamente glicosilati, e ii) combinando cellule CAR-T con l'agente di glicosilazione 2DG, che si accumula preferenzialmente in masse tumorali, possono aprire la strada per un'immunoterapia di successo contro i tumori solidi.
Disclosures: Bonini: Intellia Therapeutics: finanziamento della ricerca. Bondanza: Novartis: occupazione.
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